肿瘤浸润淋巴细胞

肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL），其实是一种并不算新鲜的技术。早在上个世纪80年代中后期，被誉为肿瘤免疫细胞治疗鼻祖之一的美国国家癌症中心的Steven Rosenberg教授就开始研发和使用TIL技术，治疗中晚期恶性黑色素瘤患者，并且让其中一小部分患者实现了临床治愈。   早在10年前，Rosenberg教授就将他所在的团队在过去一些年里断断续续治疗的近100例晚期恶性黑色素瘤患者的临床资料进行了汇总： 22%的患者肿瘤完全消失，而且疗效十分持久，这部分患者的3年生存率为100%，5年生存率为93%，几乎可以判定为临床治愈。 此后，Rosenberg教授团队以及学术界其他学者又对TIL技术进行了各种各样的优化和改良，进一步提高了疗效，同时简化了生产工艺、标准化了生产流程，从而让这一抗癌黑科技有了商业化和大规模推广的可能。 不过，要想让一款抗癌技术真正得到业内的广泛认可，那么最直接的手段就是开展一项3期多中心随机对照临床试验，并且获得阳性的结果，这样基本上绝大多数病友和医学家都会心悦诚服地接受新药、新技术。 千呼万唤，关于TIL技术的、成功的3期临床试验，终于在今年的欧洲临床肿瘤学会议上首次公布了数据。 这项由荷兰国家癌症中心的医学专家主持的多中心3期随机对照临床试验，入组的是标准治疗（86%的患者接受过PD-1抗体治疗）失败的晚期恶性黑色素瘤患者，1:1随机分组，实验组接受的是TIL技术治疗，对照组接受的是CTLA-4抗体治疗。 实验组的患者入组后会挑选一个2-3cm的肿块进行手术切除，用以制备TIL细胞，然后先接受环磷酰胺+氟达拉滨清髓准备，等TIL细胞制备完成后，进行细胞回输同时加上大剂量白介素2扩增，每一位患者接受的TIL细胞数都在5*10^9以上。对照组接受的是标准剂量的伊匹木单抗治疗。 总计168名患者参加了随机分组，两组各有84名受试者，中位随访了33.0个月，结果显示：相比于CTLA-4抗体，TIL技术治疗组有效率翻倍（21%提高到了49%），完全缓解率翻倍（7%提高到20%），中位无疾病进展生存期也翻倍（3.1个月到7.2个月），中位总生存期也有所提高（18.9个月提高到了25.8个月，未达统计学阳性）。 这样一份阳性的数据，有望支撑TIL技术在不久的将来正式上市，造福更多的病友。 另一方面，国内的学者在TIL技术领域也有自己的尝试。不久前，中山大学附属肿瘤防治中心就公布了一项I期临床试验的数据： 27名接受了同步放化疗的局部晚期宫颈癌患者入组，并通过微创手术取得了肿瘤组织，其中的20位患者可以获得足够多的TIL细胞，成功率是74.1%。此后，其中的12位患者顺利地接受了TIL细胞的回输，9名患者在同步放化疗及TIL细胞回输后实现了肿瘤完全缓解，疗效维持时间最长的已经超过2年。 这虽然只是一个规模很小的I期临床试验，但是已经可以看到不俗的疗效，同时更重要的是安全性不俗，显示出国内的学者也已经初步掌握了这项抗癌黑科技，未来有望进一步改良和优化后逐步走向大规模推广。下图是这项临床试验中2位肿瘤完全缓解患者的成功案例： 参考文献： [1]. Durable complete responses in heavily pretreated patients with metastatic melanoma using T-cell transfer immunotherapy. Clin Cancer Res. 2011 Jul 1;17(13):4550-7. [2]. https://oncologypro.esmo.org/meeting-resources/esmo-congress/treatment-with-tumor-infiltrating-lymphocytes-til-versus-ipilimumab-for-advanced-melanoma-results-from-a-multicenter-randomized-phase-iii-trial [3]. Phase I study of adjuvant immunotherapy with autologous tumor-infiltrating lymphocytes in locally advanced […]

文章来源：国际细胞临床与研究   99%的肿瘤患者都不知道，自己的肿瘤组织中深藏着一群杀癌能力最强的免疫细胞，它们被称为肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）。 研究人员发现，通常，TIL细胞多的患者预后更好，因为TIL细胞在控制癌症进展及治疗中发挥重要的作用。这些细胞虽然珍贵，但却是每个肿瘤患者体内都存在的。那么为什么这些淋巴细胞不能完全清除癌症呢？ 警惕，肿瘤患者TIL细胞处于衰竭状态！ 研究发现，肿瘤患者体内的氧气和重要的营养物质都被肿瘤剥夺，导致最有杀伤能力的TIL细胞进入衰竭状态，无法再有效的识别和攻击肿瘤细胞，因此，全球的研究人员都在寻找方法来“激活”这些TIL细胞，重新“唤醒”免疫系统来清除肿瘤。 成功“唤醒”TIL细胞，这些肿瘤患者的肿瘤被清除了 美国国家癌症研究院（NIH）的外科主任，同时也是免疫界泰斗Steven Rosenberg教授及其团队已经成功研发出体外培养方法，把这些肿瘤组织中的特异性淋巴细胞TILs富集起来，再扩增回输给患者，就能够发挥抗肿瘤作用，这就是大名鼎鼎的TILs细胞疗法，目前这款疗法经过近30年的临床验证，已经在各类实体肿瘤中显示出强大的抗癌潜力，很多晚期患者经过治疗重新回到了正常生活，更值得振奋的是，TILs疗法预计将在2022年提交上市申请，一旦获批，这将是用于实体肿瘤的首款细胞免疫疗法，意义重大。 01 成功抗癌12年，首个接受TILs疗法的晚期胆管癌患者成为超级幸存者 没有人能看出来，这位充满自信，在刚刚过去的2021年4月份胆管癌年会开幕式上侃侃而谈的成功女士，曾经是一名晚期的胆管癌患者，命悬一线。如今，她已经成功抗癌12年，不仅成功回到正常生活，还找到了人生的新方向和使命，成为美国胆管癌基金会的宣传主任，为更多的患者服务，帮助他们重获新生。 2009年，当时只有41岁的Melinda Bachini被确诊为晚期胆管癌。在经历了无数次的治疗，复发，在治疗，再复发后，Melinda陷入了绝境，她的肿瘤已经侵袭到了全身，双肺，肝脏中都布满了大大小小的肿瘤，临床上已经没有任何可用的治疗方案，命悬一线。 当她找到Rosenberg教授，并接受了实验性的免疫疗法TILs治疗后，奇迹发生了： 第一次治疗420亿个TILs回输两周之后，困扰她很久的慢性咳嗽开始缓解了。治疗后仅仅一个月，她已经和家人去高山滑雪了！ 为了让Melinda得到更好的治疗效果，Rosenberg教授又为她安排了第二次回输，这次回输细胞的数量比上次还多，当1270亿个专门识别肿瘤细胞的免疫细胞，浩浩荡荡地进入了Melinda的体内。 效果真的惊人！她全身肿瘤开始迅速缩小，体力恢复很快。 下面的对照图可以非常明显看到，第二次治疗前肺部布满的肿瘤，包括一些个头非常大的，第二次TIL治疗20个月后复查，这些肿瘤都非常显著的缩小了，专家认为这很可能是瘢痕。 她的成功案例也被发表在了国际重磅期刊《Science》上启发和鼓舞着更多的人。原文链接：成功抗癌12年，首个接受TILs免疫疗法的晚期胆管癌患者成为超级幸存者 02 快速起效，TILs疗法为黑色素瘤患者带来重生奇迹 TILs疗法目前在临床研究中治疗最成功的癌症就是黑色素瘤。 在最近公布的两项TILs疗法在黑色素瘤的研究中，研究结果表明，晚期黑色素瘤患者的完全缓解率可达到 22-24%，总体缓解率超过 50%。更重要的是超过 90% 完全缓解的患者可以保持无癌状态超过五年！ 52 岁的M女士是一位临床上极晚期的葡萄膜黑色素瘤患者，这类癌症非常罕见。确诊后M女士接受了所有可用的治疗方案，包括前沿的免疫检查点抑制剂，不幸的是，所有的常规全身治疗均无效，癌症疯狂的侵袭全身的器官，出现广泛的骨，肝脏，腹膜，大网膜的转移。 在接受了TILs治疗后，病情出现了快速的好转，仅一个月，她的疼痛今儿全身的肿瘤病灶开始迅速缩小，治疗三个月后复查，发现全身的病灶已经快速的消退， 显着转移负担的案例，这是一种孤儿疾病，对包括免疫检查点抑制剂在内的所有常规23如正电子发射断层扫描 (PET) 成像所示，患者出现广泛的骨、肝脏、腹膜和网膜转移灶（图 2））。在使用肿瘤反应性 TIL 进行 ACT 治疗后，她展示了与疼痛和早饱症状缓解相关的疾病负担显着且快速的消退。 03 肺癌：无法手术的晚期肺癌，治疗9个月后病灶全部消失 “当我们启动这项研究时，我们从未期望看到完全缓解。这在肺癌中非常罕见。但是，有两名患者确实通过个性化TIL治疗获得了完全缓解，这意味着他们的扫描结果已经完全没有肿瘤。”–Creelan博士（美国莫菲特癌症中心） Sheri Pummill就是其中幸运的一位。 2017年3月，做了28年辩护律师的Sheri Pummill被诊断为晚期非小细胞肺癌，更糟的是她已经没有机会接受手术了。在痛苦的化疗后，病情还是在不断进展，临床上已经没有更好的治疗选择。 在2019年3月，她接受了TIL治疗。“我能形容的唯一感觉就像，你死了，然后又重生了。” Pummill接受治疗后激动的说。 在治疗4周后，Creelan博士为她进行了CT扫描，结果显示，Pummill的肺部肿块竟然缩小了38％。治疗9个月后，再次扫描的结果显示，已经没有任何肿瘤了，Creelan博士说，她被归类为完全响应者！ 现在，Pummill接受TIL治疗已经一年多了，她没有新的病灶或肿块。她说：“我非常感谢莫菲特癌症中心和Creelan博士。我还有足够的时间实现人生的新目标，和孙子一起去世界各地旅行，享受生活” 。原文链接：两名患者完全缓解！新型免疫疗法给晚期肺癌患者带来新希望 04 晚期乳腺癌：900亿“活”的细胞回到体内，全身癌症完全持久消退 2014年12月，佛罗里达州一位名叫朱迪·帕金斯（Judy Perkins）的 49 岁妇女被诊断出患有IV […]

文章来源：国际细胞临床与研究   根据美国癌症协会的数据，被诊断为非小细胞肺癌并已扩散到身体远处的人的平均 5 年生存率为 6%。对于小细胞肺癌，相同情况下的 5 年生存率为 3%。得了肺癌是不是就意味着只能等死？并不是！ 来看2组真实的患者故事！ 患者故事一： 四期肺癌，使用TILs疗法4周后肿瘤缓解，9个月后完全消失 2019年2月，当了28年律师的Sheri Pummill不得不放弃自己的事业，开始新的斗争——抗癌！ 早在2017年3月，Pummill感觉呼吸困难，她以为是上呼吸道感染，开了些抗生素服用，却依然没有好转，通过CT扫描证实她患的是4期非小细胞肺癌！ 没法进行手术的Pummill肺部已经出现胸腔积液，并开始接受口服化疗方案。但几个月没有反应后，她被告知只剩下唯一的选择——标准化疗方案。 当化学疗法并不奏效时，她的女儿开始收集Pummill的病历，打算联系实习医院莫菲特癌症中心的新型细胞免疫疗法。 意外惊喜！她成为其中一名完全缓解的幸运儿 女儿给她约见的是莫菲特癌症中心的 Ben Creelan博士，此时他正在筹备一项TILs（肿瘤浸润淋巴细胞）疗法的临床试验。 这项临床试验是利用患者自身的活免疫细胞对抗癌症，早在之前成功治疗黑色素瘤后，目前正在对非小细胞肺癌的疗效进行评估。外科医生通过切除患者的肿瘤，并在实验室内解剖并培养T细胞。然后，这些可以检测和侵袭肿瘤的细胞在至少一个月的过程中被扩增到数十亿个细胞。一旦被注入患者体内，T细胞大军便可以寻找并杀死癌细胞。 在TILs治疗之前，Pummill接受了nivolumab（一种免疫检查点抑制剂）的治疗，以便让TILs发挥更大的杀伤效果。在2019年3月，她终于接受了TILs治疗。 那种感觉就像是死了又重生了！她激动地形容治疗后的感觉。 在治疗4周后，CT扫描显示，她的肺部肿块缩小了38%，直到9个月后，再次扫描已经没有任何肿瘤了，已达到完全缓解！ CT扫描图（图1位治疗前，图2是治疗4周后，图3位治疗40周后） 患者故事二： 生命仅剩6个月，他不信命！积极寻求更多治疗方法 2019年8月，对于46岁的托尼·伯顿来说简直是如遭晴天霹雳，他不幸的在那个夏天被诊断出4期肺癌，医生告知他预后很差，可能只有4~6个月的生存时间。然而他拒绝相信生命就此走到尽头，倔强的他急于寻求更多治疗方法。   柳暗花明又一村，尝试新型TILs疗法让他转危为安 幸运的是，伯顿的第二个医生，路易斯维尔健康大学布朗癌症研究所的杰森·切斯尼博士给了他希望，提供了一次参加医学试验的机会，该医学试验为一项新型的免疫疗法。 伯顿的主治医生切斯尼解释道：“这是一种基于细胞的免疫疗法。目前正在全球范围内多家知名癌症中心开展临床试验，布朗癌症中心是包括肯塔基州和印第安纳州唯一提供这一疗法的癌症中心。” 这种免疫疗法也是被大家熟知的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）疗法。 伯顿很荣幸成为布朗癌症中心首位接受治疗的肺癌患者，他的成功将给更多的患者带来希望。 它不是药物，而是治疗过程有些类似于骨髓移植。研究人员将这一小部分宝贵的细胞提取出来在体外进行大量的扩增再回输到伯顿体内，相当于把体内抗癌的“兵力”扩大到千万亿级别，将体内的癌细胞清除干净。 伯顿说，到目前为止他已经切除了6个肿瘤。 “到今天为止，我只剩下一个肿瘤。我希望下一次扫描肿瘤会完全消失。”他说。   切斯尼说，目前的免疫疗法已经使癌症死亡人数降低了25％。而这种治疗方法已被淋巴瘤患者证明是有效的，他希望美国FDA在明年正式批准该治疗方法。 从没有治疗方法到肿瘤完全消失，从生存期只剩6个月到只剩下一个肿瘤，给Sheri Pummill和伯顿带来生存希望的tils疗法，到底是一种什么样的神仙存在呢，我们一起来认识一下。 tils肿瘤浸润淋巴细胞 随着肿瘤免疫学研究的不断发展，肿瘤免疫疗法已成为继手术、放疗、化疗之后的第四大肿瘤治疗方式。其实患者手术切除的肿瘤组织中深藏着杀癌能力最强的一群免疫细胞——肿瘤浸润淋巴细胞。 科学家研究发现，在癌症的早期阶段，免疫系统试图动员一些特殊的淋巴细胞来攻击肿瘤，这些淋巴细胞具有识别和攻击肿瘤的能力，并可以深入肿瘤组织。科学家将其命名为肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）。 TILs疗法，简单点讲就是将手术切除的肿瘤组织中的淋巴细胞分离纯化，挑选出其中能特异性抗癌的淋巴细胞，扩增活化后回输。是由免疫界泰斗Rosenberg及其团队发现的。 tils具体实施步骤： 第一步，我们得到病人的肿瘤组织块，其中混杂着体积较大的肿瘤细胞（浅蓝色）以及体积小而圆的T淋巴细胞（红色，绿色，深蓝色）； 第二步，将不同种类的T淋巴细胞在细胞板上克隆化，并加入高浓度的IL-2来选择培养； 第三步，在IL-2的刺激下不同种类的T淋巴细胞都得到了克隆扩增，形成了细胞群； 第四步，用病人的肿瘤细胞和扩增后的T淋巴细胞反应，凡是能够发生杀瘤效应的T淋巴细胞群作为阳性TIL群留下（红色），其余的丢弃（绿色，深蓝色）； 第五步，用负载了肿瘤特异性抗原的树突状细胞（DC）进一步扩增培养肿瘤特异性的TIL，三周内培养10亿个TIL；最后，回输给预先做了清髓的肿瘤病人。 目前，TILs疗法预计2021年提交上市申请，一旦FDA批准，这将是首款用于实体瘤的细胞免疫疗法，将给癌症患者带来巨大的生存获益。 国际细胞临床与研究提醒患者： 国内细胞免疫治疗技术，包括CAR-T细胞、树突细胞疫苗、NK细胞、TILs细胞、TCR-T细胞治疗、癌症疫苗等技术均处于临床试验阶段，未获准在医院正式使用。国内患者可以参加正规临床试验，在医生的监管下使用，国际细胞临床与研究不推荐患者贸然尝试任何医疗机构和研发机构的收费治疗。 […]

目前，已经有很多指标可以预测PD-1抑制剂疗效了，最常见有：PD-L1表达、MSI/dMMR、肿瘤基因突变负荷（TMB）、肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）： PD-L1表达，需要拿肿瘤组织切片做免疫组化； MSI，微卫星不稳定，需要拿肿瘤组织切片或者血液标本做基因检测； dMMR，需要拿肿瘤组织切片做4个蛋白的免疫组化，4个蛋白质中至少有一个缺失，即代表dMMR阳性； TMB，需要拿肿瘤组织切片或者血液标本做基因检测； TIL，需要拿肿瘤组织切片做免疫组化染色（如CD3、CD4、CD8等）…… 上述指标，单独使用，均可以一定程度预测PD-1抗体的疗效，但是区分度并不是100%。也就是说，PD-L1阳性的患者并不是100%有效，而PD-L1阴性的患者，也并不是100%无效。此外，上述指标在不同癌种各有侧重。比如，肺腺癌，PD-L1表达和TMB检测意义更大，而MSI检测绝大多数都是阴性的；反之，消化道肿瘤，MSI检测更合适；而目前的研究提示，对于乳腺癌等少数肿瘤而言，TIL或许是最值得探索的。 单个指标，既然有这样那样的弊端，近期越来越多的科学家主张多个指标联合；但是，多个指标联合，就要求纳入的指标尽可能简单，否则检测的成本就会大幅度上升，其可行性就会下降。 近期，JCO发表的一篇论文，用PD-L1表达和肿瘤大小这两个指标，就实现了较为理想的预测效果。 495名晚期恶性黑色素瘤患者，接受PD-1抗体K药治疗，中位随访了43个月。根据病人PD-L1表达情况，可以分为2类：PD-L1阳性、PD-L1阴性。根据病人肿瘤直径大小，可以分为3类：直径小于5cm、直径在5-10厘米之间、直径大于10cm。综合这两个指标，就可以把所有患者分成6类： （1）PD-L1阳性、直径小于5cm； （2）PD-L1阳性、直径5-10cm之间 （3）（4）（5）…… （6）PD-L1阴性、直径大于10cm。 分别统计这6类人群接受K药治疗后，肿瘤完全缓解、部分缓解的概率，发现差别显著。其中疗效最棒的一组，也‍就是第（1），完全缓解率42.7%，有效率66.7%；疗效最差的一组，完全缓解率1.9%，有效率18.5%——两者完全缓解率之差，差20多倍！ 此外，由于肿瘤直径测量起来毕竟还是有一定的难度（很多医院影像科医生，懒得在报告里给出肿瘤的大小；而广大病友自己又普遍不会拿尺子量，因为毕竟不知道到底片子上那个地方是肿瘤）；因此，该研究团队还给肿瘤直径找了一个很接近的替代指标，那就是未接受治疗前的LDH值（抽血查肝肾功能，都会有LDH这个数值）。根据LDH值，可以分为三类：LDH正常范围，LDH超标1-2倍，LDH超标2倍。这样基本和肿瘤直径的分类，可以媲美。 这样就很明确了，肿瘤直径较小（LDH正常范围内）、PD-L1阳性的恶性黑色瘤患者， 最适合接受PD-1抑制剂治疗。至于其他癌种，或许也会有类似的组合指标陆陆续续推出，敬请期待！   参考文献： [1]Durable Complete Response After Discontinuation of Pembrolizumab in Patients With Metastatic Melanoma. DOI: https://doi.org/10.1200/JCO.2017. 75.6270 [2]Robert C, Long GV, Schachter J, et al: Longterm outcomes in patients (pts) with ipilimumab (ipi)- naive advanced melanoma in […]