甲基化测序

癌症对每个人和家庭来说都是一场灾难，对国家来说是一笔极大的公共卫生项目支出，根据2019年国家癌症中心发布的中国恶性肿瘤流行情况分析报告显示，随着恶性肿瘤发病数持续上升，我国每年所需的相关医疗花费超过2200亿元。 面对这一现状，唯有进行肿瘤早筛，在肿瘤发生发展的源头，将其扼杀，才能逆转这个局面。 肿瘤早筛，国家一再强调，并发布的一系列文件，也表明了国家治理癌症医疗问题的决心。 2019年7月，《健康中国行动（2019-2030）》中特别提出了“癌症防治行动”。 设定了硬性的行动目标：到2022年和2030年，总体癌症5年生存率分别不低于43.3%和46.6%；癌症防治核心知识知晓率分别不低于70%和80%；高发地区重点癌种早诊率达到55%及以上并持续提高；基本实现癌症高危人群定期参加防癌体检。 同年9月，国家卫生健康委等10部门联合制定了《健康中国行动——癌症防治实施方案（2019—2022年）》。 到2022年，癌症防治体系进一步完善，危险因素综合防控取得阶段性进展，癌症筛查、早诊早治和规范诊疗水平显著提升，癌症发病率、死亡率上升趋势得到遏制，总体癌症5年生存率比2015年提高3个百分点，患者疾病负担得到有效控制。 2021年5月24日，国务院办公厅印发《深化医药卫生体制改革2021年重点工作任务》，提出：扩大高发癌症筛查覆盖范围，启动县级癌症筛查和早诊早治中心建设试点。 肿瘤筛查尤为重要。   目前，肿瘤早筛对大部分的老百姓来说还是相对陌生。由于我国14亿的人口基数，致使医疗资源显得很是匮乏，同时由于传统的癌症筛查方法的局限性，例如血清学肿瘤标志物准确性低，假阳性率、假阴性率高；内镜检查作为一个侵入性的检查方式，受检者依从性低；B超、CT等影像学检查普及度不高等一系列问题，导致我国的肿瘤筛查现状并不理想，急切地需要一种新的肿瘤筛查手段，弥补空白。     随着分子生物学的高速发展以及在临床的应用越来越广泛，以及液态活检技术的不断发展，液态活检应用于肿瘤早筛成为当下最具潜力的早筛技术路径。   液体活检指通过对血液样品等非固体生物组织的采集，检测生物标志物，进而对全身进行肿瘤分析。目前液体活检针对的生物标志物可以分为三类： 1.血液中完整的细胞，即循环肿瘤细胞（CTC）； 2.收集由肿瘤细胞释放的外泌体（EV）； 3.分析游离的肿瘤 DNA 或 RNA，如循环肿瘤 DNA（ctDNA）、循环无细胞 RNA（cfRNA）、miRNA 等。 固体与液体活检样品中分析物的比较   从肿瘤发生与转移机制看，肿瘤细胞通过被动分泌（坏死或凋亡）与主动分泌释放外泌体及 ctDNA、cfRNA 等进入血液，可在超早期探测到肿瘤信号。而 CTC 细胞的形成主要在肿瘤转移时，肿瘤上皮细胞通过 EMT 效应转化为具有间质表型的细胞，粘附能力减弱，失去与基底膜的连接并从原发灶肿瘤上脱落从而进入到血液系统。因此 CTC 在早期肿瘤中含量较低，即使在肿瘤转移患者中每百毫升全血中也仅有 1-10 个 CTCs， 富集难度较大。同时由于 ctDNA 甲基化能够追溯肿瘤组织来源等临床价值，我们认为以 ctDNA 为代表的液体活检技术在肿瘤早筛领域有较大发展潜力。 肿瘤转移与血液中的肿瘤成分 ctDNA 基因突变检测：信号放大是痛点，已知突变检测 PCR 足以胜任   为了追踪肿瘤，需要区别 ctDNA 与正常 cfDNA 的区别，目前主要通过基因突变、甲基化修饰状态、拷贝数异常，以及核小体站位等作为区分依据。基因突变是造成癌症的根本原因之一，因此也是最先遭到检测分析锁定的对象。   […]