PD-1/PD-L1科普患教

PD-L1检测里的门道:不同的检测标准,最终结果可能完全不同!

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精彩导读:
作为红透治疗圈的“神药”PD-1,一直以来都以患者肿瘤组织的PD-L1表达来预判疗效。但你想过检测标准之间可能存在的巨大差异么?选对正确的检测机构(试剂盒),有时比正确的治疗决策更重要!

 

PD-1/PD-L1抗体单独使用,在绝大多数晚期实体瘤中,只有10-30%左右的有效率;言外之意,如果单独使用免疫治疗,一大半病友是无法获得令人满意的疗效的。

盲目用药,不仅浪费了金钱,还白白承受了副作用,同时还有可能耽误病情。因此,寻找合适的分子标志物,在用药前就把更可能起效的人群筛选出来,精准用药,是学术界以及广大病友最关心的问题。

截止目前PD-L1染色、MSI(dMMR)检测是唯一的两项正式被国内外官方机构认可的、可以预测PD-1抗体疗效的分子标志物。

PD-L1染色价格相对低廉,而且直观上就容易理解,因此是各地推广的相对而言最好的一个疗效预测标志物。不过,PD-L1染色,听上去很简单(不就是送一份标本,去做PD-L1免疫组化染色么);然而,这里面有诸多细节,要是疏忽了,不仅可能影响最后的PD-L1染色结果,而且可能因此干扰了免疫治疗的决策。今天,咚咚给大家分享一下PD-L1染色这件事里面的诸多门道:

 

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不同的抗体与试验平台

 

PD-L1免疫组化染色,需要采用PD-L1抗体作为“染料”;目前市场上存在上五花八门的“染料”,有的是经过相关国家药监部门审核批准,有的是经过大规模临床试验检验,但更多的是各个医院、各个实验室自行研发和组配的未经检验的“染料”——时不时出现病友PD-L1染色阴性,盲试PD-1抗体有效;或者明明PD-L1染色强阳性、使用PD-1抗体一点效果也没有的情况。

虽然,PD-L1阴性的患者,免疫治疗的有效率不是0%;PD-L1强阳性的病人,免疫治疗的有效率也不是100%,上述结果,理论上也是可以接受的。但是,的确也存在不少病友把标本送到一些商业公司或者基层医院病理科,进行的是完全不合规范、结果也不靠谱的PD-L1染色。

目前,在各大国际多中心临床试验中最常用的PD-L1染色抗体,有4种:Dako公司研发的22C3、28-8,以及Ventana公司研发的SP263和SP142。

PD-1抗体K药的临床试验,御用的染色抗体是Dako 22C3。目前国内外均已经正式批准,K药用于晚期PD-L1表达超过1%,尤其是超过50%的非小细胞肺癌一线治疗。这里所指的表达超过1%或者超过50%,严格意义上讲,必须是用Dako22C3这款PD-L1染色抗体染出来,也是最正规、最标准的。

另一方面,PD-1抗体O药的临床试验,御用的染色抗体是Dako28-8;PD-L1抗体I药的临床试验,御用的染色抗体是SP263;PD-L1抗体T药的临床试验,御用的染色抗体是SP142。

那么,这四款最大牌的PD-L1染色抗体之间,到底有没有区别呢?

2017年阿斯利康公司牵头,找来了500例晚期非小细胞肺癌病友的组织标本,分别利用Dako22C3、Dako28-8以及SP263进行PD-L1染色,结果显示:这三个染色抗体之间的吻合率超过90%。

与此同理,耶鲁大学医学院的教授收集了90例非小细胞肺癌患者的标本,分别利用Dako22C3、Dako28-8以及SP142这三款不同的抗体进行染色。

结果显示:Dako22C3和Dako28-8之间的吻合率较好,但SP142这款抗体染色较浅、且阳性率较低——前两者染色结果显示:90份标本中PD-L1表达超过1%的病人占60%以上,表达超过50%的病友也在20%左右;但利用SP142进行染色,PD-L1表达超过1%的病人只有32%,表达超过50%的病友只有6%。下图展示的是同一个病人的切片,用4种不同的抗体,染出来的结果,明显着色的程度、阳性细胞的比例大相径庭:

一句话,不同的染色抗体,染同一个病人的组织标本,有可能结果是不一样的;病友在选择做PD-L1染色同时,一定要确定该检测机构所采用的染色抗体到底是什么。

 

2

不同的评分标准

TPS vs CPS

 

肿瘤组织中,除了癌细胞,还有周围的间质细胞(如免疫细胞、内皮细胞、纤维细胞等)。因此,一份肿瘤组织标本染完色,着色的细胞既有可能是癌细胞,也有可能是其他细胞。那么,到底如何评判PD-L1的表达水平呢?

目前,有两大流派:

○ 第一个是TPS流派,仅关心肿瘤组织中的癌细胞,仅计算癌细胞里被染色的比例,从而划分PD-L1的阴性、阳性以及出具PD-L1表达的比例;

○ 另一个是CPS流派,不仅关心癌细胞,还关心周围组织里的免疫细胞,通过综合评估肿瘤组织里的癌细胞和免疫细胞被染色的强弱和比例,从而划分PD-L1的阴阳性。

目前绝大多数临床试验,均采纳的是TPS流派的观点;不过T药临床试验多数采纳的是CPS流派的观点。病友在拿到自己的PD-L1染色结果的时候,要善于分析到底是癌细胞还是免疫细胞上的PD-L1表达水平。

 

3

标本的年代

新鲜组织 vs 陈旧切片

 

有一个经常被病友提及的问题,那就是目前手头上能拿到的标本是XX年前取得,还能用么?从原则上讲,标本当然是越新鲜越好;但是,总不能逼迫每一个晚期实体瘤患者,重新做穿刺活检甚至手术去获取最新鲜的标本吧。那么,新鲜的标本和陈旧的标本,到底有多大差异呢?

日本的 Hataji O教授对137份非小细胞肺癌标本进行了PD-L1染色,其中包括28份陈旧的标本(保存时间大于半年)和109份新鲜的标本(保存时间小于半年)

结果显示:两者染色的结果相差很小。不过该研究纳入的标本数量较少,且以半年为界区分陈旧和新鲜,该结果还有待进一步确认。

在著名的入组了上千人的Keynote001临床试验中,有足够的标本进行PD-L1染色的病友有1033人。其中455人是陈旧标本,578人是新鲜标本。

结果显示:陈旧标本中PD-L1表达超过50%的病人占40%;而新鲜标本中PD-L1表达超过50%的病人占45%。那些利用新鲜标本染色,结果呈现阳性的病友,接受K药治疗后,死亡风险的下降幅度更大、患者获益更明显。

因此,我们还是鼓励病友尽量提供保存时间较短的新鲜标本进行检测,一般1-2年内的标本,是绝大多数临床试验可以接受的。保存时间更长的陈旧标本,很可能会鼓励重新取标本。

 

4

标本的大小

手术标本 vs 穿刺活检

 

还有一个经常被提及的问题,那就是是不是必须是手术切下来的大块组织,才可以送去做PD-L1染色,穿刺活检的小标本,会不会影响结果?

2018年西雅图的IzevbayeI教授研究发现,穿刺活检的小标本将会导致35%的病人PD-L1染色结果被误判。2019年,加拿大的Melosky B教授比较了手术大标本和细针穿刺的淋巴结小标本,分别进行PD-L1染色,结果提示:两者吻合率大约在90%左右。

因此,对于做过手术,有手术标本的病友,肯定是手术标本进行染色更靠谱;没有合格的手术标本的病友,拿穿刺活检的标本进行染色,也是一个目前看来可以接受的方式。

 

5

标本的形态

常规标本 vs 体液细胞块

 

有一部分病友,不仅没有手术标本,连合格的穿刺活检的标本都没有;那么,能否抽血进行PD-L1染色呢?这个,毫无疑问肯定是不行的。免疫组化染色必须是在一个固态的玻璃片上进行;取外周血、尿等标本,肯定是行不通的。

不过,近年来,有专家尝试将胸水、腹水等标本中的癌细胞浓缩富集起来,然后固定在玻璃片上,再进行PD-L1染色。这种退而求其次的方法,是否可行呢?

法国的 Hofman P教授拿30例胸水浓缩而来的细胞块、40例支气管镜刷片的标本进行了PD-L1染色,结果发现80%以上的患者是可以获得PD-L1染色结果的,而且吻合率还行。因此,实在没有办法获得手术或者穿刺活检标本的病友;或许可以考虑胸水、腹水细胞块。下图展示了用Dako22C3对穿刺活检、胸水细胞块标本进行染色的结果:

 

 

参考文献

1. Agreementbetween Programmed Cell Death Ligand-1 Diagnostic Assays across MultipleProtein Expression Cutoffs in Non-Small Cell Lung Cancer.Clin Cancer Res. 2017 Jul15;23(14):3585-3591.

2. AProspective, Multi-institutional, Pathologist-Based Assessment of 4Immunohistochemistry Assays for PD-L1 Expression in Non-Small Cell Lung Cancer.JAMA Oncol. 2017 Aug 1;3(8):1051-1058

3. Comparableimmunoreactivity rates of PD‐L1in archival and recent specimens from non‐smallcell lung cancer.ThoracCancer. 2018 Nov; 9(11): 1476–1482.

4. Useof archival versus newly collected tumor samples for assessing PD-L1 expressionand overall survival: an updated analysis of KEYNOTE-010 trial.Ann Oncol. 2019 Feb 1;30(2):281-289

5. SmallBiopsies Misclassify up to 35% of PD-L1 Assessments in Advanced Lung Non-SmallCell Lung Carcinomas.ApplImmunohistochem Mol Morphol. 2018 Nov/Dec;26(10):701-708

6. PD-L1testing on the EBUS-FNA cytology specimens of non-small cell lung cancer.Lung Cancer. 2019 Oct;136:1-5. doi:10.1016/j.lungcan.2019.07.033

7. Useof the 22C3 anti-programmed death-ligand 1 antibody to determine programmeddeath-ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lungcancer patients.CancerCytopathol. 2018 Apr;126(4):264-274. doi: 10.1002/cncy.21977. Epub 2018 Feb 7.

 

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本文由来源 兰田医生,由 小D 整理编辑!

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